Dosificación de urea en sangre.
La urea es el producto final del metabolismo de las proteínas y los aminoácidos en el cuerpo humano. En la degradación de las proteínas, se obtienen varios aminoácidos, que pierden su grupo amino. Este grupo amino se transforma en amoníaco, que es transformado a nivel de hígado en urea. La urea en sangre es filtrada por los glomérulos renales, se reabsorbe parcialmente en los túbulos, pero la mayor parte se excreta en la orina. Esta es la principal vía de eliminación del exceso de nitrógeno en el organismo humano.
La determinación del nivel en sangre de la urea (azoemia), junto con la dosificación del nivel de creatinina, son los análisis más usados para evaluar la función renal. El nivel de urea en sangre puede elevarse en pacientes cuya dieta es abundante en proteínas, pero un alto nivel de urea en sangre junto con aumento del nivel de creatinina, es indicativo de un deterioro en la función renal.
Otras patologías que pueden aumentar la urea en sangre son: insuficiencia cardíaca congestiva, infecciones, obstrucciones en la vía urinaria, etc.
En el año 1913, Marshall desarrolló un test para determinar la azoemia, mediante la enzima ureasa. Esta enzima actúa sobre la urea, liberando amoníaco. Fueron ideados varios métodos para dosificar este amoníaco liberado, entre ellos el test de indofenol de Berthelot y la reacción de Nessler.
Pero no fue sino hasta el año 1965, que Talke y Schubert publicaron un método completamente enzimático para la determinación de la azoemia, basado en la acción de la ureasa y la glutamato deshidrogenasa (GLDH). En este método se basan la mayoría de las técnicas utilizadas actualmente para la dosificación de urea en sangre y orina.
Para la medición de azoemia, la extracción de sangre del paciente debe realizarse en ayunas, por punción venosa o arterial. La sangre extraída puede colocarse en un tubo con anticoagulante, heparina por ejemplo, o bien utilizar un tubo sin anticoagulante. La sangre debe ser centrifugada, para separar las células de la sangre del suero o plasma.
Este suero o plasma se pone en contacto con los reactivos para la medición de urea, ocurriendo la siguiente reacción:
Urea + H2O———ureasa——-> 2 NH4 + CO3
La urea es hidrolizada por la acción de la enzima ureasa, liberándose amoníaco y carbonato.Luego el amonio producido reacciona con el alfacetoglutarato y la NADH contenidos en el reactivo, bajo la acción de la enzima GLDH, obteniéndose glutamato y
NAD + alfacetoglutarato + NH4 + NADH ——-GLDH——> L- glutamato + NAD+ + H2O
La reducción de la absorbencia debida al consumo del NADH se mide cinéticamente.
Esto significa que la solución inicialmente tiene una cierta concentración conocida de NADH, con una determinada absorbencia. A medida que el NADH se consume, la absorbencia de la solución disminuye.
Esta disminución se mide fotométricamente, durante un período de tiempo específico. A mayor concentración de urea en sangre, menor será la absorbencia medida transcurrido ese tiempo.